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MOLT-4 細(xì)胞 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析
產(chǎn)品名稱:MOLT-4 細(xì)胞
中文名稱:人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞
種屬:人
來(lái)源: 急性T淋巴細(xì)胞白血??;男性
培養(yǎng)條件:1640
生長(zhǎng)狀態(tài):懸浮
2017年新學(xué)期,迎著朝陽(yáng),放飛夢(mèng)想,久別重逢,相聚一堂,百尺竿頭,更進(jìn)一步,學(xué)無(wú)止境,自立自強(qiáng),為國(guó)爭(zhēng)光,慧穎細(xì)胞庫(kù)為答謝各位莘莘學(xué)子的厚愛,在新學(xué)期開學(xué)之際,將慧穎細(xì)胞庫(kù)1223株細(xì)胞特惠出售,更多活動(dòng)詳情,請(qǐng)致電市場(chǎng)部!
MOLT-4 細(xì)胞 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析
有的客戶在COS-1細(xì)胞復(fù)蘇傳代后發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞狀態(tài)不好,形態(tài)不佳,透光度亦不好,如果老師認(rèn)為復(fù)蘇過(guò)程沒(méi)問(wèn)題,那就核實(shí)下是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問(wèn)題,還有確信拿來(lái)的細(xì)胞沒(méi)問(wèn)題。
有的老師認(rèn)為首先應(yīng)該懷疑凍存,實(shí)際上復(fù)蘇出問(wèn)題的可能非常小,因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單,而且死板。
1、確認(rèn)下凍存的時(shí)候是不是消化的時(shí)間過(guò)長(zhǎng),這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個(gè)問(wèn)題,但我們因?yàn)檫@個(gè)問(wèn)題就兩種肺癌細(xì)胞和一種肝癌細(xì)胞專門做過(guò)試驗(yàn),這個(gè)是絕大部分人細(xì)胞復(fù)不活的一個(gè)原因。太長(zhǎng)的消化時(shí)間會(huì)讓細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時(shí)候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。
2、老師的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會(huì)死亡。
3、老師的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過(guò)7%,大于5%,太多也不好。
4、老師在凍存的時(shí)候是不是把DMSO混均勻,這個(gè)有一些影響,但不算太大。
5、老師的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個(gè)事情,因?yàn)檫@個(gè)東西流程長(zhǎng)。
6、如果老師的細(xì)胞污染,你是否能很快看到。從這個(gè)角度講建議去除離心這步。
7、老師的細(xì)胞在凍存前是否過(guò)密。
還有,我們是不贊成孵箱污染這個(gè)概念的,所有在一個(gè)孵箱里的細(xì)胞都污染一個(gè)細(xì)菌的話,這個(gè)細(xì)菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因?yàn)榉跸錈o(wú)論你如何處理都有大量的細(xì)菌,問(wèn)題在操作。我們的細(xì)胞房不換拖鞋,非常臟,別人的細(xì)胞都污染,很多細(xì)胞都污染到絕種,但我們的只污染一次(兩年內(nèi)只有兩瓶),那次是因?yàn)楫?dāng)初有某高校組織學(xué)生參觀我們細(xì)胞庫(kù)給動(dòng)過(guò)了,我們每次細(xì)胞擺放順序都是記住的。如果老師老懷疑孵箱污染,我們會(huì)認(rèn)為老師的復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)驗(yàn)還需要進(jìn)一步熟練和積累經(jīng)驗(yàn)。
每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問(wèn)題,這個(gè)很重要,不能靠猜。
MOLT-4 細(xì)胞 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析
MN60 人B細(xì)胞白血病細(xì)胞 人 B細(xì)胞白血?。荒行?nbsp; 1640 懸浮
COLO-1 人角質(zhì)形成層細(xì)胞 人 角質(zhì)形成層 DMEM 貼壁
Hut-102 人皮膚T淋巴瘤細(xì)胞 人 皮膚;T淋巴瘤 1640 懸浮
HPMC 人腹膜間皮細(xì)胞 人 腹膜間皮細(xì)胞 1640 貼壁
SK-N-FI 人腦神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 人 神經(jīng)母細(xì)胞瘤;男性 DMEM 貼壁
OCI-LY1 人彌漫大B淋巴瘤細(xì)胞 人 彌漫大B淋巴瘤;男性 IMDM 懸浮
hRPE 人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞 人 視網(wǎng)膜;色素上皮細(xì)胞 1640 貼壁
SG231 人膽管上皮癌細(xì)胞 人 肝內(nèi)膽管癌;男性 1640 貼壁
CCLP1 人膽管癌細(xì)胞 人 肝內(nèi)膽管癌;女性 DMEM 貼壁
hESC 人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞 人 子宮內(nèi)膜;間質(zhì)細(xì)胞;女性 EMEM 貼壁
BAr-T 人食管上皮細(xì)胞 人 食管;HGNC-TERT轉(zhuǎn)化;男性 DMEM 貼壁
HIBEC 人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞 人 肝內(nèi)膽管;上皮細(xì)胞 1640 貼壁
KYSE180 人食管鱗癌細(xì)胞 人 食管鱗癌;男性 1640 貼壁
melan-a 小鼠黑色素細(xì)胞 小鼠 黑色素細(xì)胞;自發(fā)永生;C57BL/6 1640 貼壁
RBSMC 大鼠腦動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 大鼠 腦動(dòng)脈;平滑肌 DMEM 貼壁
H4IIEC3 大鼠肝癌細(xì)胞 大鼠 肝癌;雄性;AxC DMEM 貼壁
LIPF155C 人膽管癌細(xì)胞 人 膽管癌 DMEM/1640 貼壁
LIPF178C 人膽管癌細(xì)胞 人 膽管癌 DMEM/1640 貼壁
SW1783 人腦星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞 人 間變性星形細(xì)胞瘤;男性 DMEM 貼壁
LICCF 人肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞 人 肝內(nèi)膽管癌 1640 貼壁
QGY7703 人肝癌細(xì)胞 人 肝癌;女性 1640 貼壁
HCCLM6 人肝癌細(xì)胞 人 肝癌 1640 貼壁
ST2 小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞 小鼠 基質(zhì);BALB/c DMDM 貼壁
K7M2-WT 小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞 小鼠 骨肉瘤;肺轉(zhuǎn)移;雌性;BALB/c EMEM 貼壁
WB-F344 大鼠肝上皮樣干細(xì)胞 大鼠 肝;自發(fā)永生;Fischer 344 DMEM 貼壁
Hs683 人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 人 少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤;男性 DMEM 貼壁
SV40-MES-13 小鼠腎小球系膜細(xì)胞 小鼠 腎小球系膜;SV40轉(zhuǎn)化 DMEM 貼壁
C8166 人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 人 T淋巴細(xì)胞白血病;HTLV-1轉(zhuǎn)化 1640 懸浮
HSAEC1-KT 人肺小氣道上皮細(xì)胞 人 肺;HGNC-TERT轉(zhuǎn)化;男性 DMEM 貼壁
L-540 人霍奇金淋巴瘤細(xì)胞 人 霍奇金淋巴瘤;女性 1640 懸浮
rRMECs 大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞 大鼠 視網(wǎng)膜微血管;內(nèi)皮細(xì)胞 DMEM 貼壁
GC9811-P 人胃癌腹膜高轉(zhuǎn)移細(xì)胞 人 胃癌 1640 貼壁
HepG2.2.15 穩(wěn)轉(zhuǎn)HBV病毒HepG2細(xì)胞 人 肝癌;穩(wěn)轉(zhuǎn)HBV病毒 IMDM 貼壁
BSC40 非洲綠猴腎細(xì)胞 非洲綠猴 腎;自發(fā)永生 DMEM 貼壁
SNU-5 人胃癌細(xì)胞 人 胃癌;女性 1640 懸浮
RASMCs 大鼠氣道平滑肌細(xì)胞 大鼠 氣道平滑肌 DMEM 貼壁
OSK-1 小鼠誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞(iPS細(xì)胞) 小鼠 誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞 DMEM 貼壁
B35 大鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 大鼠 神經(jīng)母細(xì)胞瘤;BDIX DMEM 貼壁
HCE-2 [50.B1] 人角膜上皮細(xì)胞 人 角膜上皮;Ad12-SV40;男性 1640 貼壁 為了應(yīng)付季節(jié)變化CV-1細(xì)胞運(yùn)輸、培養(yǎng)帶來(lái)的真菌等污染問(wèn)題,公司特做以下建議:
1)細(xì)胞的運(yùn)輸、轉(zhuǎn)移過(guò)程中,請(qǐng)勿打開自封袋;拿放細(xì)胞時(shí)請(qǐng)持瓶體,切勿在非無(wú)菌環(huán)球中碰觸、擰動(dòng)瓶口封口膜位置
2)進(jìn)入生物安全柜前,打開自封袋拿出培養(yǎng)瓶,噴上酒精放進(jìn)操作臺(tái)(不建議使用酒精棉球擦拭),撕開封口膜后,用酒精燈外焰對(duì)瓶口燒灼一圈(3秒左右)
3)豎立培養(yǎng)瓶,擰開瓶蓋(如是貼壁細(xì)胞,請(qǐng)用真空泵或吸管移除原配培養(yǎng)基,切勿讓瓶口處的液體回流進(jìn)瓶?jī)?nèi))
4)更換為含10%-20%血清的*培養(yǎng)基,嚴(yán)格按照無(wú)菌操作要求繼續(xù)培養(yǎng)
MOLT-4 細(xì)胞 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析
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