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CNE1-lmpl( 轉(zhuǎn)lmpl基因鼻咽癌細(xì)胞)詳細(xì)描述:
CNE1-lmpl( 轉(zhuǎn)lmpl基因鼻咽癌細(xì)胞)培養(yǎng)細(xì)胞的常規(guī)觀察:
細(xì)胞接種或傳代以后,實(shí)驗(yàn)者每天或至多間隔1~2d,要對細(xì)胞做常規(guī)性檢查。觀察細(xì)胞形態(tài)和生長情況以及培養(yǎng)的pH變化、有無污染等。根據(jù)細(xì)胞動態(tài)變化,做換液或傳代處理,如發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)及時采取措施。
檢測原理:
細(xì)胞發(fā)生凋亡或壞死,其細(xì)胞DNA均發(fā)生斷裂,細(xì)胞內(nèi)小分子量片斷增加,高分子DNA減少,胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)DNA片斷。但凋亡細(xì)胞DNA斷裂點(diǎn)均有規(guī)律的發(fā)生在核小體之間,出現(xiàn)180-200bp片斷,而壞死細(xì)胞的DNA斷裂點(diǎn)為無特征的雜亂片斷,利用此特征可以確定群體細(xì)胞的死亡,并可與壞死細(xì)胞區(qū)別。
檢測步驟:
1.將凋亡細(xì)胞裂解后高速離心,其上清液中含有核小體
2.在微定量板上吸附組蛋白體
3.加上清夜使抗組蛋白抗體與核小體上的組蛋白結(jié)合
4.加辣過氧化物酶標(biāo)記的抗DNA抗體使之與核小體上的DNA結(jié)合
5.加酶的底物,測光吸收制
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