產(chǎn)品名稱：NK-92細(xì)胞

中文名稱：人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞

生長(zhǎng)狀態(tài)：懸浮生長(zhǎng)

形態(tài)特性：淋巴母細(xì)胞

特征特性：NK-92是從一位患有急進(jìn)性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細(xì)胞衍生來的一株白細(xì)胞介素-2依賴型NK細(xì)胞株。 這株細(xì)胞對(duì)很多惡性細(xì)胞有細(xì)胞毒性；鉻釋放試驗(yàn)顯示它能殺死K562和Daudi細(xì)胞。 NK-92細(xì)胞(經(jīng)過照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細(xì)胞的功能。 NK-92細(xì)胞有以下特征： CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表面標(biāo)記陽性，CD56亮；CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, C

NK-92細(xì)胞，用10％胎牛+10%馬血清 +50μg/mlKANA+MEM培養(yǎng)液，37℃ 下置于5％CO₂培養(yǎng)箱中。待細(xì)胞融合至80％，用0．25％胰酶消化傳代后接種(細(xì)胞密度5 XlO⁴)于培養(yǎng)瓶或孔板，待細(xì)胞融合至約70％后用于實(shí)驗(yàn)。

細(xì)胞株培養(yǎng)方法如下： 

1.貼壁細(xì)胞換液：

1)吸光培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液。

2)用1xD-hank`s洗一次。

3）加入適量的新鮮培養(yǎng)液，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

2.懸浮細(xì)胞換液

1)吸光培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液放入15ml離心管中離心1500rpm 5min。

2)細(xì)胞沉淀用1xD-hank`s洗一次。

3)加入適量的新鮮培養(yǎng)液，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

3.細(xì)胞傳代（貼壁細(xì)胞傳代采用胰酶消化法，常用消化液為0.25%的胰蛋白液）

1）吸光培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液。

2）用1xD-hank`s洗一次。

3）加入0.5ml-1ml 0.25%的胰蛋白酶液（以消化液能覆蓋整個(gè)瓶底為準(zhǔn)）。

4）靜止2-10分鐘（顯微鏡下動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)）。

5）吸去胰蛋白酶液，加入培養(yǎng)基。

6）用吸管吸取瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液，反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，形成細(xì)胞懸液。

7）吸取1/5-1/10細(xì)胞懸液接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。

8）加入適量的新鮮培養(yǎng)液，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

4.細(xì)胞凍存：

1)預(yù)先配制凍存液：90%胎牛血清+10%DMSO

2)取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)細(xì)胞經(jīng)胰酶消化后加入培養(yǎng)液終止胰酶反應(yīng)，離心（1500rpm 5min）去上清留沉淀加適量?jī)龃嬉?，用吸管吸打制成?xì)胞懸液（1 XlO⁵-5X10⁶/ml)

3)加入1ml細(xì)胞懸液于凍存管中，密封后標(biāo)記凍存細(xì)胞名稱和凍存日期。

5.細(xì)胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出凍存管，迅速投入37度-38度水浴中

2）使其融化5min內(nèi)用培養(yǎng)液稀釋至原液體的10倍以上，低速離心1500rpm 5min

3）去上清，加入培養(yǎng)液，細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)