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人結(jié)腸癌細(xì)胞系:SW48細(xì)胞,SW480細(xì)胞,CACO-2細(xì)胞,SW620細(xì)胞,HCT-8細(xì)胞,HCT/V細(xì)胞,HCT-116細(xì)胞,LoVo細(xì)胞,HRT-18細(xì)胞,HT-29細(xì)胞等
人宮頸癌細(xì)胞系:hela細(xì)胞,HT-3細(xì)胞,C33A細(xì)胞,SN12C細(xì)胞,SKG-IIIa細(xì)胞,Hela S3細(xì)胞,DoTc2-4510細(xì)胞,Ca Ski細(xì)胞 ,ME-180細(xì)胞等
DC2.4細(xì)胞株 MC38細(xì)胞株,MLE-12細(xì)胞,bEND.3細(xì)胞 HT-22細(xì)胞,HK-2細(xì)胞 THP-1細(xì)胞 WRO細(xì)胞 FRO細(xì)胞 Molt-4細(xì)胞系 SH-SY-5Y細(xì)胞 U87-MG細(xì)胞
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慧穎細(xì)胞庫提供SKMEL-2細(xì)胞|ATCC引進(jìn)|人惡性黑色素瘤細(xì)胞,復(fù)蘇細(xì)胞、凍存細(xì)胞均可提供。全國各地均可發(fā)貨,全國統(tǒng)一價格,原至澳門、香港、新疆、內(nèi)蒙古、福建、寧夏等地區(qū)。提供SHIN3細(xì)胞的來源背景|特征特性|生長狀態(tài)|細(xì)胞形態(tài)|代數(shù)|價格|培養(yǎng)條件|操作注意事項(xiàng)|售后說明等?;鄯f400多種類細(xì)胞株細(xì)胞系,20株耐藥株,傳代次數(shù)少,活力高,*,深得客戶信賴!
產(chǎn)品名稱:SKMEL-2細(xì)胞
中午名稱:人惡性黑色素瘤細(xì)胞
來源:美國ATCC
種屬:人
來源:皮膚
生長狀態(tài):貼壁生長
細(xì)胞形態(tài):多邊形
代數(shù):3-5代
數(shù)量:大量
庫存狀態(tài):現(xiàn)貨
質(zhì)控:無污染、無支原體、符合標(biāo)準(zhǔn)
SKMEL-2細(xì)胞|ATCC引進(jìn)|人惡性黑色素瘤細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟:
1.佩戴眼鏡和手套,從液氮罐中取出安瓿或冷凍管。
2.迅速放入38℃水浴中,并不時搖動,在1分鐘內(nèi)使其*融化,然后在無菌下取出細(xì)胞。
3.在1000r/min速度下離心5~10分鐘,棄去上層液,加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中,接種濃度1×109/L,置37℃溫箱靜置培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng),觀察生長情況。若細(xì)胞密度較高,及時傳代?;驘o需離心直接將細(xì)胞加入瓶中,并加入培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng)12~24小時后,充去上清,換入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
細(xì)胞復(fù)蘇的注意事項(xiàng):
1.細(xì)胞復(fù)蘇時要注意融化凍存細(xì)胞的應(yīng)注意融化凍存細(xì)胞速度要快,可不時搖動安瓿或冷凍管,使之盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。
2.凍存液對細(xì)胞有毒性,解凍后必須用Dhanks洗兩遍才能移入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。培養(yǎng)液中血清不能太少。
3.從液氮拿出來,以zui快速度丟入37度水浴,等細(xì)胞液剛剛化完取出,加培養(yǎng)液稀釋。這樣可以避免復(fù)蘇過程中細(xì)胞液中有冰晶的出現(xiàn),冰晶會破壞細(xì)胞膜及細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的。
4.剛復(fù)蘇的細(xì)胞還是少折騰它好,細(xì)胞37°快速解凍后直接放入預(yù)熱的培養(yǎng)基。
5.DMSO在4度以下對細(xì)胞無毒,4度以上有毒;復(fù)蘇必須盡快除去。要記得慢凍速溶!
6.取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套,護(hù)目鏡。細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。
7.常溫下二甲基亞砜(DMSO)對細(xì)胞的毒副作用較大,因此,必須在1-2 min內(nèi)使凍存液*融化。如果復(fù)蘇溫度太低,會造成細(xì)胞的損傷,所以選擇40℃復(fù)蘇。
8.貼壁細(xì)胞復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)流程是將解凍后的細(xì)胞懸液先進(jìn)行離心,以去除冷凍保護(hù)液DMSO對細(xì)胞的損傷,但是離心也會對剛復(fù)蘇的狀態(tài)欠佳的細(xì)胞產(chǎn)生損傷。也有的實(shí)驗(yàn)操作是將解凍后的細(xì)胞懸液先直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),第二天換液。這可能使培養(yǎng)基中少量的DMSO對細(xì)胞造成損傷。
細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁細(xì)胞較少的原因:
1.凍存細(xì)胞的時候是不是消化時間過長,這是一般人注意不到的地方,要知道太長的消化時間會上細(xì)胞復(fù)蘇時失去鐵壁能力。
2.有可能是細(xì)胞凍存液的原意,細(xì)胞凍存液的質(zhì)量不好也會導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
3.你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。
4.你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。
5.凍存時溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個事情,因?yàn)檫@個東西流程長。
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公司所提供的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及其子代,不能用于人體實(shí)驗(yàn)和臨床診斷、治療。
細(xì)胞狀態(tài)不好解決方法:培養(yǎng)基一次不要配太多,根據(jù)用量決定。
細(xì)胞外源微生物的污染:細(xì)胞不宜長期體外培養(yǎng),因?yàn)橥庠次⑸镂廴镜膸茁蚀蟠筇岣摺R装l(fā)現(xiàn)和難發(fā)現(xiàn)的,影響細(xì)胞狀態(tài)。
建議:實(shí)驗(yàn)前凍存一批細(xì)胞,隔幾個月重新復(fù)蘇。既保證實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞代數(shù)*,又將外源污染的后果降到zui低。
致電或電聯(lián) 咨詢SKMEL-2細(xì)胞的傳代次數(shù)、報價、以及技術(shù)咨詢、SKMEL-2細(xì)胞的說明書等等。
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IMDM培養(yǎng)基(GIBCO,貨號C12440500BT)+10%進(jìn)口胎牛血清(GIBCO,貨號10099141)+1.5mM L-G(L-谷氨酸胺)
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